液相色譜柱的使用方法

瀏覽： 3327| 更新時(shí)間：2016-11-09 |

液相色譜柱的使用方法：

液相色譜柱在使用前，進(jìn)行柱的性能測(cè)試，并將結(jié)果保存起來(lái)，作為今后評(píng)價(jià)柱性能變化的參考。但要留意：液相色譜柱柱性能可能由于所使用的樣品、活動(dòng)相、柱溫等條件的差異而有所不同；另外，在做柱性能測(cè)試時(shí)是按照色譜柱出廠報(bào)告中的條件進(jìn)行（出廠測(cè)試所使用的條件是*條件），只有這樣，測(cè)得的結(jié)果才有可比性。

1、樣品的前處理：

a、使用活動(dòng)相溶解樣品。

b、使用予處理柱除往樣品中的強(qiáng)極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì)。

c、使用0.45μm的過(guò)濾膜過(guò)濾除往微粒雜質(zhì)。

2、活動(dòng)相的配制：

液相色譜是樣品組分在柱填料與活動(dòng)相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分離的目的，因此要求活動(dòng)相具備以下的特點(diǎn)：

a、活動(dòng)相對(duì)樣品具有一定的溶解能力，保證樣品組分不會(huì)沉淀在柱中（或長(zhǎng)時(shí)間保存在柱中）。

b、活動(dòng)相具有一定惰性，與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)（特殊情況除外）。

c、活動(dòng)相的黏度要盡量小，以便在使用較長(zhǎng)的分析柱時(shí)能得到好的分離效果；同時(shí)降低柱壓降，延長(zhǎng)液體泵的使用壽命（可運(yùn)用進(jìn)步溫度的方法降低活動(dòng)相的黏度）。

d、活動(dòng)相的物化性質(zhì)要與使用的檢測(cè)器相適應(yīng)。如使用UV檢測(cè)器，使用對(duì)紫外吸收較低的溶劑配制。

e、活動(dòng)相沸點(diǎn)不要太低，否則輕易產(chǎn)生氣泡，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)無(wú)法進(jìn)行。

f、在活動(dòng)相配制好后，一定要進(jìn)行脫氣。除往溶解在活動(dòng)相中的微量氣體既有利于檢測(cè)，還可以防止活動(dòng)相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。

3、活動(dòng)相流速的選擇：

因柱效是柱中活動(dòng)相線性流速的函數(shù)，使用不同的流速可得到不同的柱效。對(duì)于一根特定的色譜柱，要追求*柱效，使用*流速。對(duì)內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱，流速一般選擇1ml／min，對(duì)于內(nèi)徑為4.0mm柱，流速0.8ml／min為佳。

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